尊龙凯时 RFL-6大鼠成纤维细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称: RFL-6大鼠成纤维细胞

生长特性: 贴壁生长

冻存条件: 无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系: DMEM+10% FBS+1% 双抗

传代方法: 第一次建议1:2传代，传代情况每2天更换培养基。

备注: 使用无菌离心管收集瓶中的培养基，留作对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞达到良好状态后，应灌满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞运输安全。收到细胞后，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净工作台中进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（最好拍摄不同倍数的照片），前三天的照片是重要的售后依据。如未提供照片，默认收到的细胞状态良好。（注意：密封培养瓶时，拧松瓶盖，传代后应分别使用原瓶完全培养基和自配的完全培养基进行对比培养。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

若细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml到培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞状态，若细胞变圆并脱落，迅速将其取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM速度离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（分至两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩并变圆后加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，离心1000RPM 5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞放置于-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（使用防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶后，用75%酒精消毒外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项：

细胞在运输过程中可能会脱落，此为正常现象。若脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行对比培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基以终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，补充年新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后在37℃、5% CO2下继续培养。

五、售后条款：

1. 细胞出现问题的重发标准包括：运输途中问题（丢失、破损、漏液）、收到后48小时内的污染问题、常温发货细胞在静置24小时后的存活率、复苏后24小时内的污染，以及收到后7天内的活性确认。
2. 不予重发的情况包括：客户造成的污染、不当操作导致细胞状态不佳、非推荐培养体系、未提供细胞培养前3天的照片等。

如您有任何疑问，请及时联系尊龙凯时客服，我们将竭诚为您提供支持与服务。